Plásmido CRISPR de Activación (h) CTLA-4: sc-400948-ACT

El gen humano **CTLA4** codifica **CTLA-4 (CD152)**, un receptor inhibidor de punto de control inmunitario expresado predominantemente en células T activadas y células T reguladoras, que frena la activación de las células T al competir con **CD28** por la unión a **CD80/CD86** en las células presentadoras de antígeno. Mediante la atenuación de la señalización coestimuladora, CTLA-4 modula vías posteriores, incluidas **PI3K–AKT**, **NF-κB** y **MAPK**, lo que ayuda a mantener la tolerancia periférica y a limitar la producción excesiva de citocinas. La expresión o señalización desregulada de CTLA-4 se asocia con la ruptura de la homeostasis inmunitaria y con respuestas linfocitarias alteradas implicadas en fenotipos autoinmunes e inflamatorios. Como nodo clave en los circuitos inmunorreguladores, **CTLA4** se estudia ampliamente en estados funcionales de las células T, en la dinámica de activación impulsada por antígenos y en los mecanismos de supresión inmunitaria.

CTLA-4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTLA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CTLA-4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTLA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTLA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CTLA-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTLA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CTLA-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CTLA-4 en células tumorales con expresión de CTLA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.