CTH CRISPR Activationプラスミド (m): sc-430767-ACT

マウスのCthは、トランススルフuration（硫黄転移）経路に属するピリドキサールリン酸（PLP）依存性酵素であるシスタチオニンγリアーゼ（CTH）をコードしており、シスタチオニンをシステイン、α-ケト酪酸、アンモニアへと変換し、細胞内の硫化水素（H₂S）産生にも寄与する。CTHは、システインの利用可能性とレドックス緩衝の調節を介して、グルタチオン代謝、酸化ストレス応答、ミトコンドリア機能、ならびに代謝恒常性に影響を与える。CTH活性の変化は、含硫アミノ酸代謝の攪乱や、炎症経路・血管生物学・神経生物学と交差するH₂S依存性シグナル伝達の異常と関連づけられている。そのためCTHは、硫黄フラックスが細胞状態やシグナル伝達ネットワークをどのように調節するかを明らかにする目的で、酸化ストレス、代謝機能障害、組織障害のモデルにおいてしばしば研究対象となっている。

CTH CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cthの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CTH CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Cth 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCth転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CTHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCth遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCTH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCth発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCTH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。