CT-R Double Nickaseプラスミド (h): sc-404578-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CT-R Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CT-Rダブルニカースプラスミド（h）およびCT-Rダブルニカースプラスミド（h2）は、CALCRを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CT-R 抗体 (2F7): sc-293299
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CT-R Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404578-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CT-R Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404578-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CALCR はヒトのカルシトニン受容体（CT-R）をコードしており、CT-R はクラスBのGタンパク質共役型受容体（GPCR）としてカルシトニンに結合し、主として Gs–アデニリルシクラーゼ系シグナル伝達に共役して cAMP を増加させます。さらに、状況に依存してホスホリパーゼC（PLC）にも共役し、下流のカルシウム依存性経路を活性化します。CT-R の活性は破骨細胞機能と骨リモデリングを制御し、細胞分化や骨吸収活性に影響する MAPK を含む他のセカンドメッセンジャー・ネットワークと統合的に作用します。選択的スプライシングによってシグナル特性の異なる受容体アイソフォームが産生されることがあり、骨をはじめとするカルシトニン応答性組織における組織特異的な反応に寄与します。CALCR シグナルの異常は骨格代謝異常の疾患に関与することが示唆されており、また複数の腫瘍タイプで観察される受容体発現変化とも関連づけられていることから、経路や細胞状態の研究における機序解明の標的としての価値が支持されています。
CT-R ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CALCR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CALCR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CALCRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CALCRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。