CstF-64T Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406358

Descripción general

CSTF2T codifica CstF-64T, una subunidad de unión a ARN del complejo factor estimulador del corte (CstF), que dirige el procesamiento del extremo 3′ y la poliadenilación de los pre-ARNm. Al influir en la elección del sitio de corte y en la poliadenilación alternativa, CstF-64T contribuye a la diversidad de isoformas de transcritos, la estabilidad del ARNm y el control de la traducción, con efectos aguas abajo sobre el estado celular y los programas de diferenciación. Su actividad es especialmente relevante en contextos de línea germinal y en modelos en los que cambios en la longitud de la 3′ UTR remodelan la regulación posranscripcional. La desregulación de la maquinaria de corte y poliadenilación, incluidas vías vinculadas a CSTF2T, se asocia con cambios amplios en la expresión génica observados en fenotipos proliferativos y de adaptación al estrés estudiados en cáncer y biología del desarrollo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CstF-64T (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CSTF2T en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CSTF2T junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CSTF2T tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CstF-64T.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CSTF2T para la investigación de la señalización de CstF-64T, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CSTF2T críticos para la función de CstF-64T
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CSTF2T para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CstF-64T CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CstF-64T CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CSTF2T. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CstF-64T (h) y el plásmido HDR CstF-64T (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CSTF2T para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CSTF2T definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.