Plásmido CRISPR de Activación (h) CSN8: sc-409800-ACT

COPS8 codifica CSN8, una subunidad central del signalosoma COP9 que regula la actividad de las ligasas de ubiquitina tipo cullin-RING mediante la desnedilación, moldeando así el recambio de proteínas dependiente de ubiquitina. Al controlar la estabilidad de reguladores clave del ciclo celular, factores de respuesta al daño del ADN e intermediarios de señalización del estrés, CSN8 ayuda a coordinar la proteostasis, la proliferación y la adaptación a las señales ambientales. La función de CSN8 se interseca con vías vinculadas a la apoptosis, la autofagia y la señalización inflamatoria, lo que refleja el papel central de la actividad del signalosoma COP9 en la homeostasis celular. La desregulación de la señalización de ubiquitina asociada a CSN8 se ha implicado en mecanismos relevantes para enfermedades, como la progresión aberrante del ciclo celular, la función alterada del proteasoma y el desequilibrio de vías de estrés en múltiples contextos tisulares.

CSN8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COPS8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CSN8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COPS8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COPS8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CSN8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COPS8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CSN8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CSN8 en células tumorales con expresión de COPS8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.