cSHMT Double Nickase Plasmid (h): sc-403678-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das cSHMT Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- cSHMT Double-Nickase-Plasmid (h) und cSHMT Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SHMT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: cSHMT: sc-365203
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
cSHMT Double Nickase Plasmid (h) | sc-403678-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cSHMT Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403678-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes SHMT1 kodiert die zytosolische Serin-Hydroxymethyltransferase (cSHMT), ein pyridoxalphosphatabhängiges Enzym, das Serin und Glycin ineinander umwandelt und dabei 5,10‑Methylentetrahydrofolat für den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel erzeugt. Durch die Bereitstellung folatabgeleiteter Kohlenstoffeinheiten unterstützt cSHMT die Thymidylat- und Purinbiosynthese, die S‑Adenosylmethionin‑abhängige Methylierungskapazität sowie die Redoxhomöostase über die Kopplung an den Folatzyklus. Die SHMT1‑Aktivität ist daher eng mit DNA‑Replikation und ‑Reparatur, epigenetischer Regulation und der mitochondrial‑zytosolischen metabolischen Koordination verknüpft. Eine veränderte SHMT1‑Expression oder ‑Funktion wurde mit einer Dysregulation des Folatstoffwechselwegs in proliferativen Erkrankungen sowie mit einer erhöhten Anfälligkeit für genominstabilitätsbezogene Phänotypen in Zellmodellen in Verbindung gebracht.
cSHMT Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SHMT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SHMT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SHMT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SHMT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.