Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cryopyrin/NALP3/NLRP3: sc-400270-ACT

NLRP3 (cryopyrine/NALP3) est un récepteur cytosolique de reconnaissance de motifs (PRR) qui initie la formation de l’inflammasome NLRP3 en réponse à divers signaux de stress cellulaire, notamment les flux ioniques, le dysfonctionnement mitochondrial, les lésions lysosomales et les espèces réactives de l’oxygène. L’assemblage de l’inflammasome favorise le recrutement d’ASC et l’activation de la caspase-1, entraînant le clivage et la sécrétion d’IL-1β et d’IL-18, et permettant une pyroptose dépendante de la gasdermine D. Cet axe intègre la signalisation de l’immunité innée avec des voies métaboliques et de détection du danger, influençant l’activation des leucocytes, l’inflammation tissulaire et la défense de l’hôte. Une activité NLRP3 dérégulée est impliquée dans les mécanismes des maladies auto-inflammatoires et inflammatoires, ce qui en fait une cible majeure pour étudier la régulation de l’inflammasome, la maturation des cytokines et les programmes de mort cellulaire dans des systèmes humains.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NLRP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NLRP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NLRP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cryopyrin/NALP3/NLRP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NLRP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cryopyrin/NALP3/NLRP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cryopyrin/NALP3/NLRP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de NLRP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.