Plásmido CRISPR de Activación (h) CRY2: sc-403171-ACT

El gen humano **CRY2** codifica la criptocromo 2, una flavoproteína sensible a la luz azul que actúa como represor central dentro del bucle de retroalimentación transcripcional–traslacional del reloj circadiano. CRY2 regula la expresión génica impulsada por CLOCK:BMAL1 al interactuar con proteínas PER y modular el recambio dependiente de ubiquitina, dando forma así a ritmos diarios en el metabolismo, la sincronización del ciclo celular y la señalización hormonal. Mediante su acoplamiento a redes de modificaciones postraduccionales, incluidas la fosforilación y la proteostasis mediada por ligasas E3, CRY2 influye en programas transcripcionales a lo largo de tejidos periféricos. La actividad o expresión desregulada de CRY2 se ha asociado con alteraciones en la regulación del ciclo sueño–vigilia y con desalineación circadiana vinculada a fenotipos metabólicos y neuropsiquiátricos, lo que la convierte en un nodo útil para estudios centrados en vías.

CRY2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CRY2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CRY2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CRY2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CRY2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CRY2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CRY2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CRY2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CRY2 en células tumorales con expresión de CRY2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.