CRTAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405828

Übersicht

CRTAP (cartilage associated protein) kodiert eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte Komponente des Prolyl-3-Hydroxylierungs-Komplexes, zu dem auch P3H1/LEPRE1 und Cyclophilin B (PPIB) gehören. Dieser Komplex koordiniert die posttranslationale Modifikation, Faltung und Qualitätskontrolle fibrillärer Kollagene und unterstützt damit den Aufbau der extrazellulären Matrix sowie die Integrität des Bindegewebes. Die Funktion von CRTAP verknüpft die Kollagenbiosynthese mit Wegen der Protein-Homöostase im ER, einschließlich chaperon-unterstützter Faltung und proteostatischer Überwachung. Ein Verlust der CRTAP-Aktivität ist mit rezessiver Osteogenesis imperfecta und verwandten Skelettdysplasien assoziiert, die durch eine fehlerhafte Kollagenreifung und Matrixorganisation gekennzeichnet sind.

Das CRTAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CRTAP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CRTAP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CRTAP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CRTAP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CRTAP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CRTAP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CRTAP-Exone abzielen, die für die CRTAP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CRTAP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CRTAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CRTAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CRTAP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CRTAP HDR-Plasmid (h) und CRTAP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CRTAP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CRTAP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.