Plásmido CRISPR de Activación (h) CrkRS: sc-402238-ACT

El CDK12 humano codifica una cinasa dependiente de ciclina que se asocia con la ciclina K para fosforilar el CTD de la ARN polimerasa II, coordinando la elongación de la transcripción con el procesamiento cotranscripcional del ARN. CDK12 es especialmente importante para sostener la expresión de genes largos y complejos implicados en la respuesta al daño del ADN, la tolerancia al estrés replicativo y el mantenimiento de la estabilidad del genoma, lo que lo vincula a la recombinación homóloga y a redes de señalización de puntos de control. La alteración de la función de CDK12 modifica programas transcripcionales que regulan la progresión del ciclo celular y la elección de vías de reparación, con efectos posteriores sobre la integridad cromosómica y la aptitud celular. En investigación biomédica, CDK12 se estudia con frecuencia en el contexto del acoplamiento desregulado entre transcripción y reparación y su asociación con fenotipos de inestabilidad genómica observados en múltiples modelos de enfermedad.

CrkRS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CrkRS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CrkRS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CrkRS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CrkRS en células tumorales con expresión de CDK12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.