Crk II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402415-ACT

O CRK humano codifica o Crk II, uma proteína adaptadora contendo domínios SH2/SH3 que acopla receptores fosforilados em tirosina e proteínas de scaffold a complexos de sinalização a jusante. O Crk II coordena a montagem de vias que controlam a sinalização de integrinas, a dinâmica de adesões focais, a remodelação do citoesqueleto de actina e a migração celular por meio de interações com parceiros como p130CAS/BCAR1, paxilina e módulos DOCK180/RAC1. Essas redes integram sinais de receptores tirosina-quinase e receptores de adesão para regular proliferação, sobrevivência e motilidade direcional. A desregulação da sinalização de CRK/Crk II tem sido implicada em invasão e metástase aberrantes e em respostas alteradas à sinalização dependente de fatores de crescimento e de adesão em câncer e outros distúrbios proliferativos.

Crk II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CRK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Crk II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CRK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CRK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Crk II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CRK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Crk II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Crk II em células tumorais com expressão de CRK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.