CREB3L1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405316-ACT

CREB3L1 (cAMP-responsive element-binding protein 3-like 1) ist ein membrangebundenes bZIP-Transkriptionsfaktorprotein, das durch regulierte intramembranöse Proteolyse aktiviert wird und in den Zellkern transloziert, um Genexpressionsprogramme zu steuern, die mit Stress des endoplasmatischen Retikulums und der Anpassung des sekretorischen Weges verknüpft sind. Es beeinflusst die Produktion der extrazellulären Matrix sowie differenzierungsassoziierte transkriptionelle Netzwerke und integriert Signale, die die Kollagenbiosynthese, zelluläre Stressantworten und die Proteostase koordinieren. Die Aktivität von CREB3L1 wurde in Zusammenhängen veränderter Gewebeumbauprozesse und Zellzustandsübergänge beschrieben, was es für mechanistische Untersuchungen fibroseähnlicher Transkriptionsprogramme und tumorassoziierter Veränderungen in Invasion, Metastasierung und Stresstoleranz relevant macht. Als transkriptioneller Regulator bietet es einen gut untersuchbaren Knotenpunkt, um zu analysieren, wie ER-Stress-Signalisierung mit Matrix-Remodeling und linienspezifischer Genexpression zusammenwirkt.

CREB3L1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CREB3L1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CREB3L1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CREB3L1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CREB3L1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CREB3L1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CREB3L1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CREB3L1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CREB3L1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CREB3L1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.