Plasmide CRISPR d'Activation (h) CREB1: sc-400160-ACT

CREB1 (protéine 1 se liant à l’élément de réponse à l’AMPc) est un facteur de transcription spécifique de séquence qui se fixe sur les éléments de réponse à l’AMPc afin de coordonner des programmes d’expression génique dépendants des stimuli. Il agit comme un effecteur central de la signalisation AMPc/PKA et intègre des signaux provenant des kinases MAPK/ERK et des kinases dépendantes du Ca2+/calmoduline via le recrutement de coactivateurs dépendant de la phosphorylation, notamment CBP/p300. La transcription régulée par CREB1 soutient la plasticité neuronale et la formation de la mémoire, l’homéostasie circadienne et métabolique, ainsi que des réponses pro-survie au stress cellulaire. Une activité dérégulée de CREB1 et les réseaux transcriptionnels dépendants de CREB ont été impliqués dans la croissance oncogénique et la résistance aux traitements, les processus neuropsychiatriques et neurodégénératifs, ainsi que des contextes de signalisation inflammatoire.

CREB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CREB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CREB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CREB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CREB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CREB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CREB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CREB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CREB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CREB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.