creatine kinase-M Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-401132-KO-2

Descripción general

CKM codifica la creatina quinasa M (CK-M), una fosfotransferasa citosólica que cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato desde la fosfocreatina al ADP para regenerar ATP, amortiguando así la carga energética celular ante demandas fluctuantes. Altamente enriquecida en músculo esquelético y cardíaco, CK-M contribuye a la homeostasis del ATP acoplada a la glucólisis, la fosforilación oxidativa y el transporte de energía mediado por la lanzadera de fosfocreatina en las miofibras. La alteración de la actividad de CKM afecta la contractilidad muscular y las respuestas al estrés metabólico, y se evalúa con frecuencia en estudios de miopatías, lesión muscular y remodelado cardiometabólico. CKM también actúa como un nodo mecanístico para investigar la adaptación energética, la función mitocondrial y la señalización vinculada al estado redox en modelos de músculo estriado.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO creatine kinase-M (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CKM en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CKM junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CKM tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína creatine kinase-M.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CKM para la investigación de la señalización de creatine kinase-M, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CKM críticos para la función de creatine kinase-M
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CKM para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido creatine kinase-M CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CKM. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR creatine kinase-M (h) y el plásmido HDR creatine kinase-M (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CKM para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CKM definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.