Plásmido CRISPR de Activación (h) creatine kinase-M: sc-401132-ACT

El gen humano **CKM** codifica la creatina quinasa M, una fosfágena quinasa citosólica que cataliza la transferencia reversible de fosfato entre el ATP y la creatina para generar fosfocreatina, amortiguando así el ATP celular y favoreciendo un recambio energético rápido. **CKM** está estrechamente asociada a la bioenergética del músculo estriado y contribuye a la homeostasis metabólica durante la contracción, conectando la demanda energética con las vías de la glucólisis y la fosforilación oxidativa. Las alteraciones en la expresión o la actividad de **CKM** se estudian con frecuencia en contextos de lesión muscular, miopatías y estrés metabólico, donde la dinámica de la fosfocreatina puede reflejar cambios en la función mitocondrial y en la energética celular. Como marcador de linaje muscular y del metabolismo energético, **CKM** también se utiliza para evaluar el estado de diferenciación, la organización sarcomérica y la remodelación metabólica en sistemas modelo.

creatine kinase-M El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CKM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

creatine kinase-M El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CKM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CKM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de creatine kinase-M. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CKM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de creatine kinase-M en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía creatine kinase-M en células tumorales con expresión de CKM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.