CRABP-II Lentiviral Activation Particles (h2): sc-402978-LAC-2

Das humane Gen CRABP2 kodiert das zelluläre Retinsäure-bindende Protein II (CRABP-II), einen zytosolischen Carrier mit hoher Affinität, der All-trans-Retinsäure puffert und ihre Zuführung zu nukleären Retinsäurerezeptoren erleichtert, um retinoidabhängige Transkriptionsprogramme zu steuern. Durch die Kontrolle der Ligandenverfügbarkeit und des subzellulären Transports beeinflusst CRABP-II die epitheliale Differenzierung, die Reifung von Keratinozyten und weitere durch Retinsäure (RA) getriebene Prozesse und ist damit mit der Regulation von Proliferation, Apoptose und entwicklungsbezogenen Gennetzwerken verknüpft. Eine fehlregulierte CRABP2-Expression und veränderte Retinoid-Signalgebung wurden mit der Krebsbiologie sowie entzündlichen Hauterkrankungen in Verbindung gebracht, wodurch dieses Ziel für die Untersuchung von Signalweg-Umprogrammierungen und kontextabhängigen RA-Antworten relevant ist. Eine auf CRABP2 ausgerichtete Geneditierung unterstützt die mechanistische Aufklärung der Retinsäure-Signalgebung, die Kartierung transkriptioneller und chromatinbezogener Veränderungen nachgeschaltet an die Aktivierung von RAR sowie funktionelle Screens in Differenzierungs- und Tumorentstehungsmodellen.

CRABP-II Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CRABP2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CRABP-II Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CRABP2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CRABP-II-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CRABP2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.