Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRABP-I (m): sc-419790

Présentation

Crabp1 code la protéine cellulaire de liaison à l’acide rétinoïque 1 (CRABP‑I), un transporteur intracellulaire à haute affinité qui tamponne et achemine l’acide rétinoïque tout‑trans afin de moduler la disponibilité des rétinoïdes dans le cytosol et le noyau. En modulant la répartition et le métabolisme de l’acide rétinoïque, CRABP‑I influence les programmes transcriptionnels dépendants de l’AR qui contrôlent les décisions de destin cellulaire, la différenciation et la mise en place des tissus. Dans les systèmes murins, Crabp1 est utilisé pour disséquer des dynamiques de signalisation des rétinoïdes dépendantes du contexte, distinctes de l’activation canonique RAR/RXR, notamment via des interactions avec le catabolisme de l’AR et la réactivité cellulaire aux signaux dérivés de la vitamine A. Une prise en charge altérée des rétinoïdes est largement pertinente pour les phénotypes du développement et les dérégulations, associées à des maladies, de la différenciation et de l’homéostasie, faisant de Crabp1 un nœud utile pour des études de perturbation à l’échelle des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRABP-I (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Crabp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Crabp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Crabp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRABP-I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Crabp1 pour l'étude de la signalisation de CRABP-I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Crabp1 essentiels à la fonction de CRABP-I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Crabp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRABP-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CRABP-I plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Crabp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRABP-I plasmide HDR (m) et le CRABP-I (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Crabp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Crabp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.