CPTII Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403401-ACT

O CPT2 humano codifica a carnitina palmitoiltransferase II (CPTII), uma enzima da membrana interna mitocondrial que catalisa a reconversão de acilcarnitinas de cadeia longa em acil-CoA, permitindo a entrada na espiral de β-oxidação. Essa etapa é essencial para a oxidação mitocondrial de ácidos graxos e para a homeostase energética em tecidos de alta demanda, ligando a atividade da CPTII à cetogênese, à produção de ATP e às respostas ao estresse metabólico. A alteração da função do CPT2 compromete o aproveitamento de ácidos graxos de cadeia longa e está associada a erros inatos do metabolismo caracterizados por oxidação de ácidos graxos prejudicada, especialmente em condições de jejum, doença ou aumento da demanda energética. Por isso, o CPT2 é amplamente estudado em vias que regulam o metabolismo mitocondrial, o manejo de lipídios e a bioenergética celular.

CPTII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CPT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CPTII O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CPT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CPT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CPTII. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CPT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CPTII no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CPTII em células tumorais com expressão de CPT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.