Plasmide Double Nickase (h) COX4: sc-400616-NIC

COX4I1 code la sous-unité IV isoforme 1 de la cytochrome c oxydase (COX4), un composant régulateur du complexe IV mitochondrial codé par le noyau, qui ajuste le transfert d'électrons du cytochrome c vers l'oxygène et soutient le pompage des protons nécessaire à la phosphorylation oxydative. COX4 relie la respiration mitochondriale à l'homéostasie énergétique cellulaire et à l'équilibre rédox, en influençant la production d'ATP, la signalisation par les espèces réactives de l'oxygène (ROS) et l'adaptation métabolique à la disponibilité des nutriments et de l'oxygène. L'altération de la fonction du complexe IV est associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale, notamment une bioénergétique déficiente et des réponses au stress modifiées, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la neurodégénérescence, les pathologies cardiométaboliques et le métabolisme tumoral. COX4I1 constitue donc une cible utile pour disséquer le contrôle de la respiration mitochondriale et son couplage aux programmes de survie, de prolifération et de différenciation cellulaires.

COX4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COX4I1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COX4I1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COX4I1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COX4I1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.