Plásmido CRISPR de Activación (m) Cox-2: sc-422489-ACT

El gen Ptgs2 de ratón codifica la ciclooxigenasa-2 (Cox-2), una enzima inducible y limitante de la velocidad que convierte el ácido araquidónico en prostaglandina H2, precursora de diversos prostanoides bioactivos. La expresión de Cox-2 se incrementa rápidamente en respuesta a citocinas inflamatorias, factores de crecimiento y estímulos microbianos, aguas abajo de las vías de señalización de NF-κB, AP-1, MAPK y TLR, vinculando la activación de la inmunidad innata con respuestas transcripcionales y paracrinas dependientes de eicosanoides. Al controlar la producción de prostaglandinas, Ptgs2 influye en el tono vascular, el reclutamiento de leucocitos, la sensibilización al dolor y la remodelación tisular, y se utiliza con frecuencia como un marcador molecular de activación inflamatoria. La actividad desregulada de Cox-2 se ha implicado en modelos de inflamación crónica, microambientes promotores de tumores y procesos neuroinflamatorios y cardiovasculares, lo que la convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la señalización impulsada por prostaglandinas.

Cox-2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ptgs2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cox-2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ptgs2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ptgs2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cox-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ptgs2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cox-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cox-2 en células tumorales con expresión de Ptgs2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.