copine 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406621

Descripción general

CPNE1 codifica la copina 1, una proteína de unión a fosfolípidos dependiente de calcio que contiene dominios C2 y un dominio A que favorece el reclutamiento a membrana y las interacciones proteína‑proteína en respuesta a señales de Ca²⁺. Se ha implicado a la copina 1 en la coordinación del tráfico de membranas, la remodelación del citoesqueleto y la transducción de señales, al acoplar los flujos de calcio con interacciones espacialmente restringidas en la membrana plasmática y en compartimentos endomembranosos. Entre los vínculos funcionales descritos se incluyen la modulación de la señalización ligada a receptores y de las respuestas al estrés celular, con efectos aguas abajo sobre programas de proliferación, migración y diferenciación. La expresión o actividad desregulada de CPNE1 se ha asociado con la biología tumoral y otros trastornos en los que la alteración de la señalización del calcio y de la dinámica de membranas contribuye a fenotipos patogénicos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos en modelos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO copine 1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CPNE1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CPNE1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CPNE1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína copine 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CPNE1 para la investigación de la señalización de copine 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CPNE1 críticos para la función de copine 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CPNE1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido copine 1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido copine 1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CPNE1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR copine 1 (h) y el plásmido HDR copine 1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CPNE1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CPNE1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.