connexin 50 Plasmide Double Nickase (h): sc-404332-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- connexin 50 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il connexin 50 Double Nickase Plasmid (h) e il connexin 50 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GJA8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: connexin 50 Antibody (B-11): sc-373801
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
connexin 50 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
connexin 50 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA8 codifica la connessina 50, una proteina delle giunzioni comunicanti (gap junction) che si assembla in connexoni esamerici per mediare lo scambio intercellulare di ioni e piccoli metaboliti. Nel cristallino, la connessina 50 supporta la comunicazione tra cellule epiteliali e cellule delle fibre, contribuendo all’omeostasi del cristallino, alla sua trasparenza e alla differenziazione coordinata durante lo sviluppo. La sua attività interagisce con i processi che regolano la permeabilità di membrana, la segnalazione del calcio e il mantenimento del sistema di microcircolazione del cristallino che sostiene la fisiologia di un tessuto avascolare. L’alterazione dell’accoppiamento dipendente da GJA8 è associata a cambiamenti nell’organizzazione delle fibre del cristallino e a fenotipi correlati alla cataratta, rendendolo un utile punto di partenza per studiare la biologia delle gap junction in modelli oculari.
connexin 50 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GJA8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GJA8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GJA8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GJA8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.