Plasmide Double Nickase (h) connexin 50: sc-404332-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) connexin 50 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide connexin 50 Double Nickase (h) et le plasmide connexin 50 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GJA8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: connexin 50 Antibody (B-11): sc-373801
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) connexin 50 | sc-404332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) connexin 50 | sc-404332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA8 code la connexine 50, une protéine des jonctions communicantes (gap junctions) qui s’assemble en connexons hexamériques afin de permettre les échanges intercellulaires d’ions et de petits métabolites. Dans le cristallin, la connexine 50 soutient la communication entre cellules épithéliales et fibres, contribuant à l’homéostasie du cristallin, à sa transparence et à une différenciation coordonnée au cours du développement. Son activité s’articule avec des processus qui régulent la perméabilité membranaire, la signalisation calcique et le maintien du système de microcirculation du cristallin, essentiel à la physiologie de ce tissu avasculaire. La perturbation du couplage dépendant de GJA8 est associée à une organisation altérée des fibres du cristallin et à des phénotypes liés à la cataracte, ce qui en fait un point d’entrée utile pour l’étude de la biologie des jonctions communicantes dans des modèles oculaires.
connexin 50 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GJA8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GJA8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GJA8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GJA8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.