Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
connexin 40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401031
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- connexin 40 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico connexin 40, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: connexin 40 Anticuerpo (B-3): sc-365107
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
connexin 40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401031 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GJA5 codifica la conexina 40 (Cx40), una proteína de uniones gap que se ensambla formando canales intercelulares que permiten el paso directo de iones y pequeños metabolitos entre células vecinas. El acoplamiento mediado por Cx40 favorece una conducción eléctrica rápida y una señalización coordinada, especialmente en las aurículas cardíacas y en el sistema especializado de conducción, y también contribuye a la comunicación endotelial que modula el tono vascular y la remodelación. Al regular la conectividad célula a célula y la propagación del impulso, las alteraciones en la función de GJA5 se asocian a fenotipos relacionados con arritmias, incluidas anomalías de la conducción auricular, y se han estudiado en el contexto de defectos cardíacos congénitos y de la desregulación vascular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO connexin 40 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GJA5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GJA5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GJA5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína connexin 40.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GJA5 para la investigación de la señalización de connexin 40, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GJA5 críticos para la función de connexin 40
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GJA5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido connexin 40 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido connexin 40 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GJA5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR connexin 40 (h) y el plásmido HDR connexin 40 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GJA5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GJA5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.