Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL9A2 (h): sc-405890

Présentation

COL9A2 code la chaîne α2 du collagène de type IX, un collagène FACIT qui s’associe aux fibrilles de collagène de type II afin de stabiliser et d’organiser la matrice extracellulaire du cartilage hyalin. En contribuant à la fibrillogenèse et aux interactions matrice–cellule, COL9A2 soutient la fonction des chondrocytes, la résistance à la traction du cartilage et les processus de mécanotransduction essentiels au développement du squelette et à l’homéostasie articulaire. Une perturbation de l’expression ou de la structure de COL9A2 est associée à des maladies héréditaires du cartilage et a été étudiée dans le contexte de phénotypes articulaires dégénératifs à début précoce et de pathologies des disques intervertébraux. En tant que composant matriciel, COL9A2 relie le remodelage de la matrice extracellulaire aux voies qui régissent l’intégrité du cartilage, notamment l’assemblage du collagène, l’organisation des protéoglycanes et la signalisation des chondrocytes en réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL9A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL9A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL9A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL9A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL9A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL9A2 pour l'étude de la signalisation de COL9A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL9A2 essentiels à la fonction de COL9A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL9A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL9A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL9A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL9A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL9A2 plasmide HDR (h) et le COL9A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL9A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL9A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.