COL9A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405890

概要

COL9A2はIX型コラーゲンのα2鎖をコードしており、II型コラーゲン線維に結合して硝子軟骨の細胞外マトリックスを安定化・組織化するFACITコラーゲンです。線維形成（フィブリロジェネシス）やマトリックス—細胞相互作用に寄与することで、COL9A2は軟骨細胞の機能、軟骨の引張強度、ならびに骨格発生と関節恒常性の維持に重要なメカノトランスダクション過程を支えます。COL9A2の発現や構造の変化は遺伝性の軟骨疾患と関連し、若年発症の変性関節表現型や椎間板病変の文脈でも研究されています。マトリックス構成要素としてのCOL9A2は、コラーゲンの集合、プロテオグリカンの配置、軟骨細胞におけるストレス応答性シグナル伝達など、軟骨の完全性を制御する経路と細胞外マトリックスのリモデリングとを結び付けます。

COL9A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCOL9A2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、COL9A2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、COL9A2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL9A2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL9A2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、COL9A2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL9A2の機能に不可欠なCOL9A2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、COL9A2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL9A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCOL9A2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、COL9A2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL9A2 HDRプラスミド（h）および COL9A2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCOL9A2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCOL9A2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。