Plasmide Double Nickase (h) COL9A1: sc-405807-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL9A1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL9A1 Double Nickase (h) et le plasmide COL9A1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL9A1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: COL9A1 Antibody (H-7): sc-376969
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL9A1 | sc-405807-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL9A1 | sc-405807-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL9A1 code la chaîne alpha‑1 du collagène de type IX, un collagène FACIT qui s’associe aux fibrilles de collagène de type II et contribue à l’organisation structurelle du cartilage hyalin ainsi que d’autres tissus riches en matrice extracellulaire. Grâce à ses interactions avec les collagènes fibrillaires et les protéoglycanes, COL9A1 soutient l’assemblage de la matrice, la stabilité des fibrilles et des propriétés biomécaniques importantes pour l’homéostasie des chondrocytes. L’activité de COL9A1 est liée à l’organisation de la matrice extracellulaire et aux processus de développement du cartilage, qui recoupent des voies de remodelage des tissus conjonctifs. Des altérations génétiques ou de l’expression de COL9A1 ont été associées à des phénotypes de dégénérescence cartilagineuse et à des chondrodysplasies héréditaires, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude de la biologie du squelette et des mécanismes des maladies articulaires.
COL9A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL9A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL9A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL9A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL9A1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.