COL6A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401069

Descripción general

COL6A1 codifica la cadena alfa 1 del colágeno tipo VI, un componente central de las microfibrillas de colágeno VI que se ensamblan en la matriz extracelular y contribuyen a la resistencia a la tracción de los tejidos y a la adhesión célula–matriz. Las redes de colágeno VI coordinan la organización de la matriz extracelular e influyen en la mecanotransducción, las señales de supervivencia y la diferenciación celular en tejidos conectivos, con vínculos funcionales con vías mediadas por integrinas y con la estabilidad de la membrana basal. Alteraciones en la expresión de COL6A1 o en su incorporación a la matriz pueden perturbar la remodelación de la matriz extracelular y la arquitectura del estroma, afectando la integridad de las miofibras y el comportamiento de los fibroblastos. La desregulación del colágeno VI se ha asociado con fenotipos neuromusculares y del tejido conectivo, y también se estudia en el contexto de la fibrosis y de la remodelación de la matriz asociada a tumores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL6A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COL6A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COL6A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COL6A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL6A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COL6A1 para la investigación de la señalización de COL6A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de COL6A1 críticos para la función de COL6A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COL6A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido COL6A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COL6A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COL6A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL6A1 (h) y el plásmido HDR COL6A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COL6A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COL6A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.