Plasmide Double Nickase (h) COL4A5: sc-401199-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) COL4A5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide COL4A5 Double Nickase (h) et le plasmide COL4A5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant COL4A5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) COL4A5 | sc-401199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) COL4A5 | sc-401199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A5 code la chaîne α5 du collagène de type IV, un composant structural central des membranes basales, qui s’assemble avec COL4A3 et COL4A4 pour former le réseau α3α4α5(IV). Cet échafaudage collagénique spécialisé soutient l’intégrité des membranes basales glomérulaires, cochléaires et oculaires, et influence l’adhésion cellule–matrice, la mécanotransduction et le remodelage de la matrice extracellulaire via des interactions avec les intégrines et les voies de signalisation associées. Une altération de COL4A5 modifie la composition des membranes basales et les propriétés de la barrière de filtration, ce qui relie son dysfonctionnement aux néphropathies héréditaires et à des manifestations syndromiques touchant l’audition et la vision. COL4A5 est donc largement étudié dans le contexte du développement rénal, de la biologie des podocytes et de l’organisation de la matrice extracellulaire, au moyen de modèles cellulaires et d’organoïdes.
COL4A5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COL4A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COL4A5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COL4A5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COL4A5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.