Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
COL12A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402361
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- COL12A1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico COL12A1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: COL12A1 Anticuerpo (A-11): sc-166020
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
COL12A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402361 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
COL12A1 codifica la cadena alfa 1 del colágeno tipo XII, un colágeno asociado a fibrillas con hélices triples interrumpidas (FACIT) que se localiza en la matriz extracelular y se asocia con las fibrillas de colágeno tipo I. Al conectar los colágenos fibrilares con otros componentes de la matriz, COL12A1 contribuye a la resistencia tensil del tejido, la mecanotransducción y la organización de la matriz pericelular, influyendo en la adhesión y la migración celular. Su función está estrechamente vinculada a las vías de remodelación de la matriz extracelular y a la señalización mediada por integrinas que dan forma a la arquitectura del estroma durante el desarrollo y la reparación. La expresión alterada de COL12A1 o sus variantes se han implicado en fenotipos hereditarios del tejido conectivo y disfunción musculoesquelética, lo que lo convierte en una diana útil para estudiar mecanismos de enfermedad impulsados por la matriz.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO COL12A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen COL12A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del COL12A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de COL12A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína COL12A1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en COL12A1 para la investigación de la señalización de COL12A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de COL12A1 críticos para la función de COL12A1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de COL12A1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido COL12A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido COL12A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus COL12A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR COL12A1 (h) y el plásmido HDR COL12A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología COL12A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana COL12A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.