Plasmide CRISPR d'Activation (h) COL11A1: sc-403512-ACT

COL11A1 code la chaîne α1 du collagène de type XI, un collagène fibrillaire quantitativement minoritaire mais essentiel sur le plan structural, qui régule la nucléation des fibrilles de collagène, leur diamètre et l’organisation de la matrice extracellulaire (MEC) dans les tissus conjonctifs. COL11A1 s’intègre à des fibrilles hétérotypiques avec les collagènes II et IX, soutenant la biomécanique du cartilage et influençant l’adhésion cellule–matrice, la migration et les voies de mécanotransduction qui façonnent l’architecture tissulaire. Des altérations de l’expression de COL11A1 et du remodelage de la MEC sont associées à des phénotypes squelettiques du développement et ont été reliées à des programmes stromaux associés aux tumeurs, où la composition de la matrice peut moduler la signalisation liée à l’invasion. En tant que composant matriciel, COL11A1 est fréquemment étudié dans le contexte de l’assemblage de la MEC, de la chondrogenèse et de la régulation du comportement cellulaire dépendante du microenvironnement.

COL11A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de COL11A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

COL11A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus COL11A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription COL11A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de COL11A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus COL11A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de COL11A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie COL11A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de COL11A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.