COG5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411474

Übersicht

COG5 kodiert eine zentrale Untereinheit des konservierten Oligomeric-Golgi-(COG)-Tethering-Komplexes, der den retrograden Vesikeltransport innerhalb des Golgi-Apparats koordiniert. Durch die Unterstützung des Vesikel-Andockens und der SNARE-abhängigen Fusion trägt COG5 zur Aufrechterhaltung der Golgi-Architektur, der Lokalisation von Enzymen und der effizienten Prozessierung sekretorischer Fracht bei. Eine Störung der COG-Komplex-Funktion beeinträchtigt die Homöostase der Glykosylierung und kann die Zusammensetzung der Zelloberfläche und der extrazellulären Matrix verändern, was Signalwege beeinflusst, die mit Proteinsortierung, Sekretion und Membranorganisation verknüpft sind. Varianten in COG5 und verwandten COG-Komponenten wurden mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen sowie breiteren Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit defektem Golgi-Transport assoziiert sind.

Das COG5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COG5-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COG5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COG5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COG5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COG5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COG5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COG5-Exone abzielen, die für die COG5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COG5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COG5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COG5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COG5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COG5 HDR-Plasmid (h) und COG5 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COG5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COG5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.