Plasmide CRISPR/Cas9 KO COG4 (h): sc-416653

Présentation

COG4 code une sous-unité centrale du complexe d’arrimage COG (conserved oligomeric Golgi), conservé au cours de l’évolution, qui maintient l’architecture de l’appareil de Golgi et coordonne le trafic vésiculaire rétrograde au sein de l’empilement golgien. En régulant l’amarrage des vésicules et la fusion dépendante des SNARE, COG4 favorise le recyclage des enzymes de glycosylation et le bon traitement des protéines sécrétées et membranaires dans l’ensemble du système endomembranaire. Une altération de la fonction du complexe COG perturbe les transports Golgi‑RE et intra‑Golgi, entraînant des modifications de la glycosylation des protéines et des effets étendus sur la sécrétion, la maturation des récepteurs et la composition membranaire. Des variants de COG4 et d’autres composants du complexe COG sont associés à des troubles congénitaux de la glycosylation et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui fait de ce gène une cible pertinente pour l’étude des mécanismes pathologiques liés au trafic golgien.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COG4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COG4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COG4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COG4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COG4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COG4 pour l'étude de la signalisation de COG4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COG4 essentiels à la fonction de COG4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COG4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COG4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COG4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COG4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COG4 plasmide HDR (h) et le COG4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COG4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COG4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.