CNOX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412433

Descripción general

ENOX1 codifica el intercambiador ecto‑NOX de disulfuro–tiol CNOX, una oxidorreductasa asociada a la membrana plasmática que acopla el intercambio de disulfuros en proteínas con la oxidación de NADH y contribuye a la homeostasis redox en la superficie celular. La actividad de ENOX1 se ha vinculado a la regulación de la transferencia extracelular de electrones, la modulación del equilibrio de especies reactivas de oxígeno (ROS) y la coordinación de procesos redox oscilatorios relacionados con el crecimiento que pueden influir en la proliferación y la adaptación metabólica. Por sus funciones en la señalización redox y el transporte de electrones asociado a membrana, ENOX1 se estudia en contextos de respuesta al estrés oxidativo, biología vascular y fenotipos celulares asociados con un control redox alterado. Se ha descrito una expresión o actividad desregulada de ENOX1 en múltiples programas transcripcionales asociados a enfermedades, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico para investigar la señalización dependiente del estado redox y la reprogramación metabólica en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CNOX (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ENOX1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ENOX1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ENOX1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CNOX.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ENOX1 para la investigación de la señalización de CNOX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ENOX1 críticos para la función de CNOX
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ENOX1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CNOX CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CNOX CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ENOX1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CNOX (h) y el plásmido HDR CNOX (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ENOX1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ENOX1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.