CNOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412433

概要

ENOX1は、細胞膜に関連する酸化還元酵素であるエクトNOXジスルフィド‐チオール交換酵素CNOXをコードしており、タンパク質のジスルフィド結合の交換反応とNADHの酸化を共役させ、細胞表面のレドックス恒常性の維持に寄与します。ENOX1の活性は、細胞外電子移動の制御、活性酸素種（ROS）バランスの調節、ならびに増殖や代謝適応に影響し得る成長関連の周期的レドックス過程の協調と関連づけられています。レドックスシグナル伝達および膜関連の電子輸送における役割を通じて、ENOX1は酸化ストレス応答、血管生物学、そしてレドックス制御の変化に伴う細胞表現型といった文脈で研究されています。ENOX1の発現や活性の破綻は、複数の疾患関連転写プログラムで報告されており、ヒト細胞におけるレドックス依存的なシグナル伝達や代謝リプログラミングを解明するための機構的ハブとしての有用性を支持しています。

CNOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるENOX1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ENOX1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ENOX1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CNOXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CNOXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ENOX1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CNOXの機能に不可欠なENOX1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ENOX1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CNOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCNOX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ENOX1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CNOX HDRプラスミド（h）および CNOX HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはENOX1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のENOX1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。