Plasmide Double Nickase (h2) CNOT6: sc-406273-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) CNOT6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CNOT6 Double Nickase (h2) et le plasmide CNOT6 Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CNOT6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CNOT6 Antibody (2193C2a): sc-81231
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) CNOT6 | sc-406273-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain CNOT6 code la sous-unité 6 du complexe CCR4-NOT, une désadénylase cytoplasmique qui raccourcit les queues poly(A) des ARNm afin de favoriser la déstabilisation des transcrits et la répression de la traduction, modelant ainsi les programmes d’expression génique en aval des protéines liant l’ARN et du silence médié par les microARN. En tant que composant catalytique du complexe CCR4-NOT, CNOT6 contribue au contrôle post-transcriptionnel de la progression du cycle cellulaire, de la différenciation et des réponses au stress via un renouvellement régulé des ARNm et des interactions avec les machineries de décapage et de dégradation. Une activité dérégulée de CNOT6 et une homéostasie de l’ARN dépendante de CCR4-NOT ont été associées à une altération des signaux prolifératifs et à des profils d’expression de gènes liés à l’immunité observés dans divers cancers et contextes inflammatoires. L’édition génomique ou la perturbation de CNOT6 permet des études mécanistiques des cinétiques de dégradation des ARNm, de la dynamique des queues poly(A) et des effets, au niveau des voies, sur la stabilité du transcriptome dans des modèles de cellules humaines.
CNOT6 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CNOT6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CNOT6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CNOT6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CNOT6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.