CNOT6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406273

Descripción general

CNOT6 (subunidad 6 del complejo de transcripción CCR4-NOT) es una deadenilasa catalítica dentro del complejo CCR4–NOT que acorta las colas poli(A) del ARNm para iniciar la degradación del transcrito y modular la traducción. Al regular la estabilidad del ARNm, CNOT6 contribuye al control génico posranscripcional en vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés, la diferenciación y la señalización inmunitaria innata. Su actividad se integra con el silenciamiento mediado por miARN y con redes más amplias de vigilancia del ARN, configurando la dinámica del transcriptoma en respuesta a señales celulares. La desregulación de la deadenilación dependiente de CCR4–NOT, incluidas alteraciones en la función o la expresión de CNOT6, se ha asociado con programas anómalos de expresión génica relevantes para la biología del cáncer y fenotipos relacionados con el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CNOT6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CNOT6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CNOT6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CNOT6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CNOT6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CNOT6 para la investigación de la señalización de CNOT6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CNOT6 críticos para la función de CNOT6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CNOT6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CNOT6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CNOT6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CNOT6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CNOT6 (h) y el plásmido HDR CNOT6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CNOT6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CNOT6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.