Plasmide Double Nickase (h) CLK1: sc-402793-NIC

La CLK1 humaine (CDC-like kinase 1) est une kinase à double spécificité qui phosphoryle des protéines riches en sérine/arginine (SR) ainsi que d’autres facteurs d’épissage, afin de réguler la dynamique du spliceosome et l’épissage alternatif des pré-ARNm. En modulant l’inclusion d’exons, la maturation de l’ARN et, en aval, les isoformes de transcrits produites, CLK1 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et des programmes transcriptionnels associés aux signaux prolifératifs. L’activité de CLK1 s’inscrit à l’interface des voies du métabolisme de l’ARN et des réseaux de régulation post-transcriptionnelle qui façonnent la diversité du protéome selon les tissus. La dérégulation du contrôle de l’épissage médié par CLK1 a été associée à des profils d’expression d’isoformes aberrants observés dans des contextes de recherche en biologie du cancer et en maladies neurologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de phénotypes dépendants de l’épissage.

CLK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CLK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CLK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CLK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CLK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.