CLIP4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-413231-LAC

Humanes CLIP4 (CAP-Gly-Domäne-enthaltendes Linker-Protein 4) kodiert einen mikrotubuli-assoziierten Faktor, der über Wechselwirkungen mit der Dynamik der Plus-Enden von Mikrotubuli an der Koordination der Zytoskelettorganisation und des intrazellulären Transports beteiligt ist. Indem CLIP4 die Mikrotubuli-Stabilität sowie transportabhängige Prozesse wie Zellpolarität und Zellteilung beeinflusst, kann es Signalwege modulieren, die zytoskelettales Remodeling mit Signaltransduktion und der Positionierung von Organellen koppeln. Veränderte Expressionsmuster mikrotubuli-regulierender Proteine, darunter Mitglieder der CLIP-Familie, wurden in proliferativen und stressadaptiven zellulären Zuständen beschrieben, was Untersuchungen von CLIP4 in Kontexten wie Migration, mitotischer Genauigkeit und Genomstabilität unterstützt. Diese biologischen Eigenschaften machen CLIP4 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur mikrotubuliabhängigen Regulation in humanen Zellen.

CLIP4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CLIP4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

CLIP4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CLIP4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen CLIP4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CLIP4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.