Plasmide CRISPR d'Activation (h) CLIP4: sc-413231-ACT

CLIP4 (CAP-Gly domain containing linker protein 4) code un facteur associé au cytosquelette, impliqué dans la régulation de la dynamique des microtubules et de l’organisation intracellulaire via des interactions avec la tubuline et les réseaux situés à l’extrémité « plus » des microtubules. En influençant la stabilité des microtubules et la coordination spatiale du cytosquelette, CLIP4 peut affecter des processus tels que le trafic vésiculaire, la polarité cellulaire et la progression mitotique. Une expression altérée ou une régulation défectueuse du cytosquelette est fréquemment associée à une migration cellulaire aberrante et à des phénotypes prolifératifs, ce qui fait de CLIP4 une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans d’autres troubles impliquant le remodelage du cytosquelette. Les travaux sur CLIP4 soutiennent également l’étude des interactions entre voies (« cross-talk ») reliant la régulation des microtubules et les programmes de signalisation qui modulent la forme cellulaire et l’adhérence.

CLIP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLIP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CLIP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLIP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLIP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CLIP4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLIP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CLIP4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CLIP4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLIP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.