CLIP-170 Double Nickase Plasmid (m): sc-425158-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLIP-170 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLIP-170 Double-Nickase-Plasmid (m) und CLIP-170 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Clip1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CLIP-170: sc-28325
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLIP-170 Double Nickase Plasmid (m) | sc-425158-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLIP-170 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425158-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-Clip1 kodiert CLIP-170, ein Mikrotubuli-Plusend-Tracking-Protein, das End-Binding-Proteine bindet und dynamische Mikrotubuli mit kortikalen sowie organellassoziierten Faktoren verknüpft. CLIP-170 reguliert die Mikrotubuli-Polymerisation, das Einfangen von Kinetochoren und den mikrotubuliabhängigen Vesikeltransport und beeinflusst dadurch Zellpolarität, Migration und den mitotischen Verlauf. Durch die Koordination von Zytoskelett-Remodeling und intrazellulärem Transport trägt CLIP-170 dazu bei, Signalausgänge zu formen, die von räumlicher Organisation abhängen, einschließlich Signalwegen, die Adhäsion und die Zuverlässigkeit des Spindel-Checkpoints steuern. Eine Fehlregulation der Mikrotubuli-Dynamik und trafficking-assoziierter Prozesse ist breit relevant für proliferative und neuroentwicklungsbezogene Phänotypen, wodurch Clip1 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur zytoskelettalen Kontrolle darstellt.
CLIP-170 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Clip1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Clip1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Clip1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Clip1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.