Plásmido Doble Nickase (h) CLIC1: sc-402391-NIC

CLIC1 codifica el canal intracelular de cloruro 1, una proteína metamórfica que puede existir como un factor citosólico soluble o asociarse a membranas celulares para influir en la conductancia de cloruro, el equilibrio redox y la regulación del pH intracelular. Se ha vinculado con la regulación del volumen celular, la dinámica del citoesqueleto y el tráfico vesicular, y se estudia con frecuencia en el contexto de respuestas al estrés oxidativo y la señalización inflamatoria. Se ha informado que la actividad y la expresión de CLIC1 cambian durante la activación de células inmunitarias y la transformación celular, lo que respalda la investigación de sus contribuciones a programas de proliferación, migración y supervivencia. La desregulación de CLIC1 se ha asociado con múltiples contextos patológicos, incluida la biología del cáncer y la neuroinflamación, lo que la convierte en una diana útil para analizar vías de adaptación al estrés y de homeostasis iónica.

CLIC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CLIC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CLIC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CLIC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CLIC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.