CLC-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403513-NIC

CLCN2は電位依存性塩化物チャネルCLC-2をコードしており、CLC-2は形質膜に存在する陰イオンチャネルとして、塩化物恒常性、膜興奮性、ならびに上皮および神経細胞におけるイオン輸送の調節に寄与します。CLC-2の活性は、浸透圧バランスやバリア機能といった過程で他のトランスポーターやチャネルと協調することにより、細胞容積の制御、上皮を介した体液移動（経上皮性の水分移動）、および電気的安定性に影響します。CLCN2機能の変化は、上皮輸送や神経系生理に関わる疾患と関連づけられており、チャネル病（channelopathies）や組織特異的なイオンフラックス制御の研究における重要性を裏づけています。CLC-2は広く発現するチャネルであるため、上皮生理、グリアおよびニューロンのシグナル伝達、さらにイオン勾配と細胞ストレス応答を結びつける機構などの文脈で、しばしば研究対象となっています。

CLC-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CLCN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CLCN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CLCN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CLCN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。