citrate synthase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402227-ACT

O gene **CS** humano codifica a **citrato sintase**, enzima da **matriz mitocondrial** que catalisa a condensação de **oxaloacetato** e **acetil‑CoA** para formar **citrato**, iniciando o ciclo do **ácido tricarboxílico (TCA)**. Ao controlar a entrada no metabolismo oxidativo, a citrato sintase sustenta a produção de **ATP**, a **anaplerose** e o fornecimento de citrato para a biossíntese de **lipídios** e **colesterol** por meio do fluxo de carbono **mitocôndria–citosol**. A atividade de CS está intimamente ligada à **biogênese mitocondrial**, à **homeostase redox** e à adaptação metabólica sob estresse nutricional. Alterações na expressão de CS ou na função do ciclo TCA mitocondrial são frequentemente estudadas em contextos de disfunção metabólica e de remodelamento bioenergético associados à **neurodegeneração**, a fenótipos **cardiometabólicos** e ao metabolismo tumoral.

citrate synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

citrate synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de citrate synthase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de citrate synthase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via citrate synthase em células tumorais com expressão de CS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.