Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CIN85 Double Nickase Plasmid (h): sc-402573-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CIN85 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CIN85 Double-Nickase-Plasmid (h) und CIN85 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SH3KBP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CIN85: sc-166862
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CIN85 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402573-NIC | 20 µg | $410.00 |
SH3KBP1 kodiert CIN85, ein Multi-Adaptor‑Gerüstprotein, das den endozytotischen Transport und die Abschwächung von Signalen koordiniert, indem es über Interaktionen mit Cbl‑Ubiquitinligasen und der endozytotischen Maschinerie Komplexe stromabwärts von Rezeptor‑Tyrosinkinasen, einschließlich EGFR, assembliert. Über seine SH3‑Domänen und prolinreiche Bindungsoberflächen reguliert CIN85 die Internalisierung, Ubiquitinierung und lysosomale Sortierung von Rezeptoren und formt damit Stärke und Dauer der MAPK‑ und PI3K‑AKT‑Signalübertragung. CIN85 trägt außerdem zum Umbau des Zytoskeletts, zur Bildung von Invadopodien und zur Vesikeldynamik bei – Prozesse, die in verschiedenen Krankheitskontexten mit Zellmigration und invasiven Phänotypen verknüpft sind. Fehlregulierte CIN85‑assoziierte Signalwege wurden im Zusammenhang mit onkogener Signalgebung, dem Turnover von Immunrezeptoren und verändertem Membrantransport untersucht.
CIN85 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SH3KBP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SH3KBP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SH3KBP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SH3KBP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.