Chymotrypsin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407305

Übersicht

CTRC kodiert Chymotrypsin C, eine sekretierte pankreatische Serinprotease, die die Aktivität von Verdauungsproteasen moduliert, indem sie Trypsinogene prozessiert und aktives Trypsin abbaut und dadurch zur Proteasehomöostase im exokrinen Pankreas beiträgt. Durch regulierte Proteolyse innerhalb des Netzwerks der pankreatischen Enzymaktivierung hilft CTRC, die nachgelagerte Proteinverdauung zu steuern und eine fehlgeleitete intrapankreatische Trypsinaktivität zu begrenzen. Eine dysregulierte CTRC-Funktion und ein verändertes Proteasegleichgewicht werden mit entzündlichen Pankreas-Phänotypen in Verbindung gebracht, einschließlich einer erhöhten Anfälligkeit für chronische Pankreatitis und damit verbundener exokriner Dysfunktion. CTRC wird daher in Signalwegen untersucht, die die Zymogenaktivierung, Stressantworten des endoplasmatischen Retikulums in Azinuszellen und proteasevermittelte Gewebeschädigung kontrollieren.

Das Chymotrypsin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CTRC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CTRC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CTRC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Chymotrypsin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CTRC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Chymotrypsin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CTRC-Exone abzielen, die für die Chymotrypsin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CTRC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Chymotrypsin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Chymotrypsin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CTRC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Chymotrypsin HDR-Plasmid (h) und Chymotrypsin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CTRC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CTRC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.