Chx10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401103-ACT

VSX2（Chx10）は、ヒトの眼の発生過程において、網膜前駆細胞の増殖、神経系細胞の運命決定、ならびに双極性介在ニューロンの分化を制御するpaired-like型のホメオボックス転写因子をコードします。Chx10は、シス調節エレメントに結合し、神経網膜における細胞周期の進行や系譜コミットメントに影響する転写プログラムを協調的に制御することで、発生の遺伝子制御ネットワークを統合します。VSX2活性の異常は、先天性の眼形成異常や、網膜の構造・機能に影響する神経発達上の欠陥と関連しており、眼の発生機構および網膜細胞アイデンティティの理解を研究するうえで重要な結節点となります。in vitroでは、VSX2の調節は、網膜オルガノイドや幹細胞由来の網膜系譜における転写回路を解析するために一般的に用いられます。

Chx10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VSX2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Chx10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VSX2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVSX2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Chx10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVSX2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるChx10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVSX2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるChx10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。