Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CHT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404869-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CHT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- CHT1 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal CHT1 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal CHT1 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di SLC5A7. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CHT1 Antibody (62-2ES): sc-33713
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CHT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-404869-ACT | 20 µg | $397.00 |
SLC5A7 codifica il trasportatore di colina 1 ad alta affinità (CHT1), un trasportatore di soluti della membrana plasmatica che media l’assorbimento di colina dipendente dal sodio, rappresentando la fase limitante della velocità per la sintesi di acetilcolina nei neuroni colinergici. Controllando la disponibilità intracellulare di colina per la colina acetiltransferasi, CHT1 collega il trasporto di membrana al ciclo delle vescicole sinaptiche e a una neurotrasmissione colinergica sostenuta. Alterazioni dell’attività di SLC5A7 sono state associate a una compromissione della segnalazione neuromuscolare e della segnalazione colinergica centrale, collegando questo trasportatore a vie rilevanti per la funzione motoria, i processi cognitivi e la regolazione autonomica. In quanto determinante della produzione presinaptica di acetilcolina, CHT1 è spesso studiato in modelli di differenziazione neuronale e in sistemi che analizzano la trasmissione sinaptica e l’accoppiamento metabolico con la sintesi dei neurotrasmettitori.
CHT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC5A7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
CHT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC5A7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC5A7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CHT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC5A7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CHT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CHT1 nelle cellule tumorali con espressione di SLC5A7 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.