Plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP1B (h): sc-406531

Présentation

CHMP1B (charged multivesicular body protein 1B) est un composant central de la machinerie ESCRT-III, qui pilote les événements de remodelage membranaire nécessaires au tri endosomal et à la biogenèse des corps multivésiculaires. Via des voies dépendantes d’ESCRT, CHMP1B contribue à la sous-régulation des récepteurs, au trafic vers les lysosomes, à la dynamique membranaire liée à l’autophagie et à l’achèvement de l’abscission lors de la cytokinèse. Une activité correcte de CHMP1B aide à maintenir la protéostasie et l’homéostasie de la signalisation en déterminant le devenir des cargos ubiquitinylés et des protéines membranaires. La dérégulation de la fonction d’ESCRT-III, y compris des altérations du trafic dépendant de CHMP1B, est fréquemment étudiée dans le cadre de processus neurodégénératifs, du bourgeonnement viral et des modifications de la signalisation des récepteurs de facteurs de croissance associées au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP1B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHMP1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHMP1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHMP1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CHMP1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHMP1B pour l'étude de la signalisation de CHMP1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHMP1B essentiels à la fonction de CHMP1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHMP1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CHMP1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CHMP1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHMP1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CHMP1B plasmide HDR (h) et le CHMP1B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHMP1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHMP1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.