Chk1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400223-LAC

Das humane Gen **CHEK1** kodiert die Checkpoint-Kinase 1 (Chk1), eine Serin/Threonin-Kinase, die die ATR-abhängige DNA-Schadensantwort auf Replikationsstress koordiniert. Chk1 reguliert den S-Phasen-Fortschritt und den G2/M-Checkpoint, indem es Effektoren phosphoryliert, die die CDK-Aktivität dämpfen, ins Stocken geratene Replikationsgabeln stabilisieren sowie eine mit homologer Rekombination verknüpfte Reparatur und einen Zellzyklusarrest fördern. Diese Signalachse ist mit Signalwegen vernetzt, die die Genomintegrität steuern, darunter der Schutz von Replikationsgabeln, die Kontrolle des Origins-Firings und der Eintritt in die Mitose, wodurch die CHEK1-Aktivität für Mechanismen chromosomaler Instabilität besonders relevant ist. Eine Dysregulation der CHEK1-Signalweg-Ausgabe wird häufig im Kontext der Tumorbiologie, von Antworten auf genotoxischen Stress sowie als Determinante der Sensitivität gegenüber DNA-schädigenden Störungen in Modellsystemen untersucht.

Chk1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente CHEK1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Chk1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der CHEK1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Chk1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen CHEK1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.