Plasmide CRISPR d'Activation (h) CHD1: sc-404299-ACT

CHD1 (chromodomain helicase DNA-binding protein 1) est un remodelateur de la chromatine dépendant de l’ATP, qui reconnaît les nucléosomes méthylés sur H3K4 via ses chromodomaines et module le positionnement des nucléosomes afin de soutenir la régulation transcriptionnelle. Il contribue aux programmes d’expression génique associés à l’ARN polymérase II, à l’accessibilité de la chromatine et à la coordination de la réplication et de la réparation de l’ADN au sein de l’euchromatine. Par ces activités, CHD1 influence la stabilité du génome et des réseaux transcriptionnels propres à l’état cellulaire, notamment des voies liées à la différenciation et aux réponses au stress. Une altération de la fonction ou de l’expression de CHD1 a été associée à une dérégulation du contrôle épigénétique en oncologie, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques sur la transcription et l’architecture de la chromatine.

CHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CHD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CHD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CHD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CHD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CHD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CHD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CHD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CHD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.