CHCHD6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425817

Descripción general

Chchd6 codifica CHCHD6, una proteína con dominio hélice-enrollada-hélice-hélice-enrollada-hélice enriquecida en las mitocondrias, donde contribuye a la organización de la membrana mitocondrial interna y a la arquitectura de las crestas. CHCHD6 se ha relacionado con procesos asociados al sistema organizador de sitios de contacto mitocondriales y crestas (MICOS) que coordinan la curvatura de la membrana, el ensamblaje de la cadena respiratoria y la dinámica mitocondrial. A través de estas funciones, CHCHD6 influye en la eficiencia de la fosforilación oxidativa, el equilibrio de especies reactivas de oxígeno y la señalización de estrés mitocondrial, lo que puede repercutir en programas de supervivencia y diferenciación celular. La desregulación de la ultraestructura mitocondrial y de la homeostasis bioenergética es relevante en modelos de neurodegeneración, disfunción cardiometabólica y otros trastornos en los que la integridad mitocondrial es un punto final experimental clave.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CHCHD6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chchd6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chchd6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chchd6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CHCHD6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chchd6 para la investigación de la señalización de CHCHD6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Chchd6 críticos para la función de CHCHD6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chchd6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CHCHD6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CHCHD6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chchd6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CHCHD6 (m) y el plásmido HDR CHCHD6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chchd6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chchd6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.