CES1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405773-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CES1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CES1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CES1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CES1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CES1: sc-365249
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CES1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405773-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CES1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405773-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Carboxylesterase 1 (CES1) ist eine Serinhydrolase, die in der menschlichen Leber stark exprimiert wird und die Hydrolyse eines breiten Spektrums endogener Lipide sowie xenobiotischer Ester, Amide und Thioester katalysiert. Durch die Regulation des Umsatzes neutraler Lipide und veresterter Metaboliten trägt CES1 zur Lipidhomöostase bei und greift in Stoffwechsel- und Entgiftungsprozesse ein, die das zelluläre Redoxgleichgewicht und inflammatorische Signalwege mitprägen. Veränderte CES1-Aktivität oder -Expression wurde mit interindividueller Variabilität im Arzneistoffmetabolismus sowie mit metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit Dyslipidämie und pathologischen Veränderungen im Kontext der Fettleber assoziiert sind. Daher wird CES1 häufig als molekulares Werkzeug eingesetzt, um den hepatischen Stoffwechsel, die chemische Biotransformation und Mechanismen zu untersuchen, die einer variablen Substanzantwort in menschlichen Systemen zugrunde liegen.
CES1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CES1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CES1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CES1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CES1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.